Una molecola di glucosio entra nel citoplasma, viene fosforilata a spese di una molecola di ATP, viene riorganizzata in fruttosio e scissa in due molecole a tre atomi di carbonio denominate GAP. Ogni GAP cede uno ione idrogeno (H+) e due elettroni ad un trasportatore di elettroni NAD+ che diventa NADH.
Un fosfato proveniente da una nuova molecola di atp si lega al GAP per poi essere riceduto formando ATP. Viene liberata una molecola d'acqua ed il fosfato rimasto si lega ad un'altra ADP formando atp e piruvato. L'equazione finale è la seguente:
